【作者】 未知
【來源】 http://home.dlmedu.edu.cn/jianyan/...23_chendian.doc
【評等】 ★★★
【內容】

免疫瓊脂雙向擴散實驗

在瓊脂內抗原和抗體各自向對方擴散，在最恰當的比例處形成抗原抗體沈澱線，觀察這種沈澱線的位置、形狀以及對比關係，可作出對抗原或抗體的定性分析。雙向擴散也可分爲試管法和平板法兩種方法。
（—）試管法
試管法由Oakley首先報道。先在試管中加入含抗體的瓊脂，凝固後在中間加一層普通瓊脂，冷卻後將抗原液體加到上層。放置後，下層的抗體和上層的抗原向中間瓊脂層內自由擴散，在抗原與抗體濃度比例恰當處形成沈澱線。此法分析效果與Oudin法相似，在臨床檢驗中罕用。
（二）平板法
平板法由Ouchterlony首先報道，是抗原抗體鑒定的最基本方法之一。該法的基本步驟是：在瓊脂板上相距3～5mm打一對孔，或者打梅花孔、雙排孔、三角孔型等（圖12-5）。在相對的孔中加入抗原或抗體，置室溫或37℃18～24h後，凝膠中各自擴散的抗原和抗體可在濃度比例適當處形成可見的沈澱線。根據沈澱線的形態和位置等可作如下三種分析。
1.抗原或抗體的存在與否及其相對含量的估計 沈澱線的形成是根據兩者比例，沈澱線如靠近抗原孔，則指示抗體含量較大；如靠近抗體孔，則指示著抗原含量較多。不出現沈澱線則表明抗體或抗原的缺如或者抗原過剩。另外，如出現多條沈澱線，則說明抗原和抗體皆不是單一的成分。因此，可用於鑒定抗原或抗體的純度。
2. 抗原或抗體相對分子量的分析 抗原或抗體在瓊脂內自由擴散，其速度受分子量的影響。分子量小者擴散快，反之則較慢。由於慢者擴散圈小，局部濃度則較大，形成的沈澱線彎向分子量大的一方。如若兩者分子量相等，則形成直線。圖12-6顯示左側沈澱線抗原分子量大於抗體，右側沈澱線則抗體大於抗原，中間一條線則爲兩者相等。抗體多爲IgG，分子量約150KD，未知抗原的分子量可做粗略估計。
3.用於抗原性質的分析 兩種受檢抗原的性質可完全相同、部分相同或完全不同。三種情況在雙向擴散中表現的基本圖形見圖12-7。
從圖12-7可以分析出，左圖中兩種受檢抗原（Ag-a）完全相同，形成一個完全融合的沈澱線；右圖中抗體爲雙價，兩種抗原完全不同（Ag-a和Ag-c）；中圖的抗體爲雙價，兩種抗原（Ag-ab和Ag-ac）皆有相同的a表位，又有不同的b和c表位，所以沈澱線呈部分融合的形狀。這種技術作爲抗原的分析，是目前免疫化學中最常用的鑒定技術之一。
4.用於抗體效價的滴定 雙向擴散技術是抗血清抗體效價滴定的常規方法。固定抗原的濃度，稀釋抗體；或者抗原、抗體雙方皆作不同的稀釋，經過自由擴散，形成沈澱線。出現沈澱線的最高抗體稀釋度爲該抗體的效價。



【心得】

此為免疫學當中相當基礎的技術 對於抗原抗體的基本反應可以以視覺化的方式清楚的呈現
對於學理的印證以及基本技術的鍛鍊都很有幫助
一般這類的技術文獻都只有英文的
現在有中文的可以供有興趣的人參考